乳制品和嬰幼兒配方乳粉克羅諾桿菌屬（阪崎腸桿菌）檢測

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乳制品及嬰幼兒配方乳粉中克羅諾桿菌屬（阪崎腸桿菌）檢測的重要性

克羅諾桿菌屬（Cronobacter spp.），原名阪崎腸桿菌（Enterobacter sakazakii），是一種革蘭氏陰性條件致病菌，廣泛存在于自然環(huán)境中。該菌對嬰幼兒健康威脅極大，尤其是新生兒、早產(chǎn)兒及免疫力低下嬰兒，可能引發(fā)敗血癥、腦膜炎等嚴重疾病，致死率高達40%-80%。嬰幼兒配方乳粉作為其主要感染途徑之一，已成為食品安全監(jiān)管的對象。因此，針對乳制品及嬰幼兒配方乳粉中克羅諾桿菌屬的檢測，是保障食品質(zhì)量安全、預防食源性疾病的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。

食品法典委員會（CAC）、世界衛(wèi)生組織（WHO）及各國監(jiān)管機構(gòu)均制定了嚴格的限量標準。例如，我國《食品安全標準 嬰兒配方食品》（GB 10765-2021）明確規(guī)定，針對0-6月齡嬰兒配方乳粉，需確?？肆_諾桿菌屬不得檢出（取樣量為3個獨立包裝，每份100g）。加強檢測不僅關(guān)乎企業(yè)合規(guī)經(jīng)營，更是保護嬰幼兒群體健康的必要措施。

檢測項目與目標

克羅諾桿菌屬檢測的核心目標是定性或定量分析樣品中是否存在目標菌，并評估污染水平。具體包括：
1. 初篩檢測：通過選擇性培養(yǎng)基分離疑似菌落
2. 生化鑒定：利用酶活性、碳源利用等特征確認菌種
3. 分子生物學檢測：通過基因特異性片段（如esaA、ompA）實現(xiàn)鑒定
4. 溯源分析：對陽性樣本進行脈沖場電泳（PFGE）或全基因組測序（WGS）等分型研究

主要檢測儀器與設(shè)備

檢測過程中需配備儀器：
- 微生物培養(yǎng)箱（25℃±1℃和36℃±1℃雙溫區(qū)）
- 實時熒光PCR儀（如ABI 7500）
- 全自動微生物鑒定系統(tǒng)（VITEK 2 Compact）
- 生物安全柜（二級A2型）
- 高壓滅菌鍋（121℃滅菌條件）
- 恒溫水浴鍋（44℃±0.5℃控溫）
- 菌落計數(shù)儀（自動成像分析）

標準檢測方法與流程

現(xiàn)行主流方法遵循標準ISO/TS 22964與我國GB 4789.40-2020：

傳統(tǒng)培養(yǎng)法（參考GB 4789.40-2020）

1. 前處理：無菌稱取100g樣品+900mL緩沖蛋白胨水，37℃預增菌18-24h
2. 選擇性增菌：轉(zhuǎn)接1mL至10mL改良月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯（mLST），44℃±0.5℃培養(yǎng)24h
3. 分離培養(yǎng)：劃線接種克羅諾桿菌顯色培養(yǎng)基，25℃±1℃培養(yǎng)48h
4. 生化鑒定：氧化酶試驗、α-葡萄糖苷酶活性檢測、API 20E生化試劑盒驗證
5. 結(jié)果判定：典型菌落呈藍綠色（顯色培養(yǎng)基），生化反應符合標準特征

分子生物學快速檢測法

1. DNA提取：采用磁珠法或煮沸法快速制備模板
2. 實時熒光PCR：針對dnaG基因設(shè)計引物探針，設(shè)置擴增程序：95℃預變性5min→95℃ 15s/60℃ 30s（40循環(huán)）
3. 熔解曲線分析：驗證擴增產(chǎn)物特異性，陽性樣本熔解溫度應在82℃±1℃
4. 確證試驗：對PCR陽性樣本仍需進行傳統(tǒng)培養(yǎng)法復核

檢測標準與規(guī)范

與國內(nèi)主要檢測標準包括：
- 中國：GB 4789.40-2020《食品微生物學檢驗 克羅諾桿菌屬檢驗》
- ：ISO/TS 22964:2006《Milk and milk products-Detection of Enterobacter sakazakii》
- 美國：FDA Bacteriological Analytical Manual Chapter 29
- 歐盟：CRL Guidance Document on Detection of Cronobacter spp.

檢測過程中需嚴格執(zhí)行質(zhì)量控制：
- 每批次實驗設(shè)置陽性對照（ATCC 29544株）與陰性對照（大腸埃希氏菌ATCC 25922）
- 實驗室環(huán)境需定期進行沉降菌檢測，確保潔凈度符合GB 4789.28要求
- 培養(yǎng)基每批次進行促生長能力驗證

結(jié)論

針對乳制品及嬰幼兒配方乳粉中克羅諾桿菌屬的檢測，需結(jié)合傳統(tǒng)培養(yǎng)法與分子生物學技術(shù)，形成多維度檢測體系。企業(yè)應建立從原料采購到成品出廠的全鏈條監(jiān)控，嚴格遵循GB 4789.40操作規(guī)范，確保檢測結(jié)果的準確性和可靠性。隨著質(zhì)譜快速鑒定、數(shù)字PCR等新技術(shù)的發(fā)展，未來檢測將趨向更高靈敏度與時效性，為嬰幼兒食品安全提供更堅實的保障。