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生物材料DNA殘留量測定法檢測項(xiàng)目報(bào)價???解決方案???檢測周期???樣品要求? |
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在生物制藥、基因治療、疫苗研發(fā)及醫(yī)療器械生產(chǎn)領(lǐng)域,生物材料中DNA殘留量的檢測是確保產(chǎn)品安全性和合規(guī)性的核心環(huán)節(jié)。宿主細(xì)胞DNA殘留可能引發(fā)免疫反應(yīng)或基因整合風(fēng)險(xiǎn),尤其是涉及哺乳動物細(xì)胞表達(dá)的生物制品(如單克隆抗體、重組蛋白)時,需嚴(yán)格控制DNA殘留量。各國藥典和監(jiān)管機(jī)構(gòu)(如FDA、EMA、NMPA)均對此提出明確要求,通常規(guī)定每劑量DNA殘留量需低于10 ng。因此,建立科學(xué)、準(zhǔn)確且的DNA殘留量檢測方法至關(guān)重要。
DNA殘留檢測涵蓋以下關(guān)鍵項(xiàng)目:
1. 總DNA殘留量測定:定量分析樣品中所有DNA的總含量
2. 宿主DNA特異性檢測:區(qū)分宿主細(xì)胞DNA與工藝添加DNA(如質(zhì)粒)
3. 片段化程度分析:評估DNA片段大小是否符合安全標(biāo)準(zhǔn)(通常要求<200 bp)
4. 外源DNA污染篩查:檢測非目標(biāo)物種DNA污染
5. 定量限與檢測限驗(yàn)證:確保方法靈敏度滿足法規(guī)要求
現(xiàn)代DNA殘留檢測依托精密儀器實(shí)現(xiàn)高靈敏度分析:
? 熒光定量PCR儀(qPCR):特異性檢測宿主DNA,靈敏度可達(dá)pg級
? 紫外分光光度計(jì)(NanoDrop):快速測定DNA濃度,適用于粗提樣品
? 毛細(xì)管電泳系統(tǒng)(如Agilent Bioanalyzer):分析DNA片段分布與純度
? 凝膠成像系統(tǒng):配合電泳法進(jìn)行半定量分析
? 高通量測序平臺:用于復(fù)雜樣本的深度污染篩查
主流檢測方法根據(jù)原理可分為三類:
1. 熒光定量PCR法(qPCR)
- 采用特異性探針標(biāo)記靶標(biāo)DNA
- 建立標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行絕對定量
- 符合ICH Q5A要求,適用于GMP環(huán)境
2. PicoGreen熒光法
- 利用雙鏈DNA特異性熒光染料
- 檢測限可達(dá)25 pg/mL
- 需配合蛋白酶K消化去除干擾蛋白
3. 紫外吸收法(A260/A280)
- 快速測定但特異性較低
- 適用于工藝中間體粗測
4. 膜雜交法(Dot Blot)
- 使用特異性DNA探針進(jìn)行半定量
- 常用于基因治療載體殘留檢測
檢測方法需符合以下標(biāo)準(zhǔn):
? 標(biāo)準(zhǔn):
- FDA Guidance for Industry: Characterization and Qualification of Cell Substrates
- ICH Q5A(R1): Viral Safety Evaluation of Biotechnology Products
- European Pharmacopoeia 2.6.7: Residual DNA檢測專章
? 國內(nèi)標(biāo)準(zhǔn):
- 《中國藥典》2020版 三部 3407 外源性DNA殘留量測定法
- YY/T 0606-2020 組織工程醫(yī)療器械產(chǎn)品DNA殘留量測定指南
? 方法學(xué)驗(yàn)證:需滿足特異性、準(zhǔn)確性(回收率80-120%)、精密度(RSD<15%)、定量限(LOQ≤10 pg)等要求
新一代檢測技術(shù)正在向更高靈敏度(如數(shù)字PCR)、多重檢測(ddPCR多靶標(biāo)分析)和自動化方向發(fā)展。同時,復(fù)雜基質(zhì)(如脂質(zhì)納米顆粒載體)的干擾消除、超低濃度DNA穩(wěn)定提取技術(shù)、快速檢測方法開發(fā)(如CRISPR-Cas12a熒光法)等仍是行業(yè)攻關(guān)方向。